H9c2 (2-1)大鼠心肌細胞是一株由Kimes·B和Brandt·B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆得到的細胞株;H9c2(2-1)細胞表現出許多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)細胞中的成肌細胞能融合形成多核的肌管,并對乙酰膽堿的刺激發生反應。如果培養基中的血清濃度下降到1%,H9c2(2-1)細胞融合發生得很快。
培養大鼠心肌細胞時,需要注意以下幾點:
1、鼠齡選擇:新生1~3d齡大鼠的心肌細胞在出生后3d內具有部分的增殖能力,而成年大鼠的心肌細胞則為終末分化細胞,不再具有分裂增殖能力。因此,建議選擇1~3d齡的大鼠進行原代培養以獲得更多活性心肌細胞。
2、細胞復蘇:溶解細胞過程要迅速,已溶解的凍存細胞不能在常溫下存放太久,需要盡快離心去除DMSO。
3、細胞凍存:推薦配比為55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO的凍存液。在凍存時,盡量吹散細胞并注意控制吹打力度。
4、細胞培養:培養條件為培養基:DMEM+10% FBS+1% P/S,推薦傳代比例為1:2~1:4,換液頻率為2~3次/周,培養箱溫度設定為37℃,5% CO2。傳代操作包括:去掉培養皿中的培養基,加入PBS進行沖洗,去上清后加入0.25%胰酶進行潤洗,去上清后放入CO2培養箱消化2~4min,加入培養基終止消化并吹打均勻。
5、注意保持細胞匯合度在30%~90%,避免細胞過度生長和分化。
6、每一步操作都要輕柔小心,以免對細胞造成損傷。
7、選用優質培養基,減少有害物質對細胞的刺激。